مقایسه دو روش متفاوت انجماد شیشه ای بافت تخمدان موش نابالغ با استفاده از رنگ آمیزی تریپان بلو

هدف: روش‏های انجمادی متفاوتی برای انجماد بافت تخمدان بیماران در معرض خطر ناباروری استفاده می‏شود. اتیلن گلیکول، دی متیل سولفوکساید و پروپاندیول، با خاصیت تشکیل کریستال‏های یخ کمتر به‏عنوان محلول‏های انجمادی نفوذپذیر پایه‏ای در مقایسه با انواع دیگر توصیه شده‏است. در مطالعه حاضر آثار دو روش انجماد شیشه‏ای متفاوت روی بافت کامل تخمدان موش نابالغ با استفاده از رنگ‏آمیزی تریپان بلو بررسی شد. مواد و روش‏ها: تخمدان موش‏های 8 روزه نژاد nmri، پس از جداسازی در گروه‏های کنترل غیر انجمادی، انجمادی 1 و انجمادی 2 دسته‏بندی شدند. محلول انجمادی 1 از محیط پایه α-mem، اتیلن گلیکول15 درصد، دی متیل سولفوکساید 15 درصد، سرم جنین گاوی 20 درصد و محلول انجمادی 2 از محیط پایه، اتیلن گلیکول 20 درصد، پروپاندیول 20 درصد و سرم جنین گاوی 15 درصد تشکیل شد. روش‏های انجمادی1 و انجمادی 2 به‏ترتیب در دمای 4 درجه سانتی‏گراد و دمای اتاق انجام شدند. مراحل ذوب در روش انجمادی 1 با استفاده از محیط پایه، سرم جنین گاوی 20 درصد و سوکروز 1 مولار و در روش انجمادی 2 با بهره‏برداری از محیط پایه، سرم جنین گاوی 15 درصد و غلظت‏های کاهشی سوکروز (1، 5/0 و 25/0 مولار) انجام شد. تخمدان‏ها در محیط پایه و رنگ تریپان بلو 4/0 درصد به‏مدت 20 دقیقه انکوبه، به‏وسیله بوئن تثبیت و در نهایت برش‏های بافتی سریالی بعد از رنگ‏آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین به‏وسیله میکروسکوپ نوری شمارش شد. نتایج: درصد زیادی از فولیکول‏های بدوی در گروه کنترل غیر انجمادی مشاهده شد و اختلاف معنی‏داری (05/0>p) بین گروه کنترل غیر انجمادی و انجمادی 1 و همچنین بین انجمادی 1 و انجمادی 2 مشاهده شد. افزایش معنی‏داری هم در شاخص زنده‏مانی هر سه دسته فولیکولی در گروه انجمادی 2 (05/0>p) نسبت به انجمادی 1 مشاهده شد. نتیجه‏گیری: انجماد شیشه‏ای با استفاده از ترکیب اتیلن گلیکول و پروپاندیول گزینه مناسب‏تری برای حفظ و نگهداری بافت تخمدان است و همچنین روش رنگ‏آمیزی تریپان بلو، به‏عنوان یک شیوه سریع و آسان برای ارزیابی بافت تخمدانی پیشنهاد می‏شود.